一、從無(wú)菌室設(shè)置上規(guī)范
微生物無(wú)菌室則應(yīng)根據(jù)日常檢驗(yàn)的微生物項(xiàng)目需要,按照國(guó)標(biāo)《GB 19489-2008實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》的生物安全等級(jí)以及《GB 4789.1食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)總則》要求設(shè)置,病原微生物分離鑒定工作應(yīng)在二級(jí)以上生物安全實(shí)驗(yàn)室( Biosafetylevel2,BSL-2 )進(jìn)行。一般食品生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)企業(yè)日常微生物監(jiān)控的無(wú)菌室按照(Biosafetylevel1,BSL-1 )安全等級(jí)設(shè)置即可。無(wú)菌室內(nèi)環(huán)境的溫度、濕度、照度、噪聲和潔凈度等應(yīng)符合工作要求:能控制溫度在15℃~25℃、 相對(duì)濕度≤80%,因此需要安裝凈化空調(diào),室內(nèi)裝備的換氣設(shè)備采用單向送風(fēng)系統(tǒng)并必須有空氣過(guò)濾裝置,送風(fēng)裝置有初、中、高級(jí)過(guò)濾器,送風(fēng)口末端設(shè)置高效過(guò)濾裝置,上送下排(送風(fēng)口安裝在無(wú)菌室頂部天花、排風(fēng)口設(shè)置在無(wú)菌室四周墻腳),確保送出的空氣潔凈,以致使無(wú)菌操作核心室潔凈度達(dá)到100000級(jí)或以上,超凈臺(tái)潔凈度達(dá)到100級(jí)。并保證無(wú)菌室保持正壓。檢驗(yàn)操作必須在無(wú)菌室內(nèi)的超凈臺(tái)上進(jìn)行。
無(wú)菌室一般是在微生物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)專辟一個(gè)小房間。面積不宜過(guò)大,約4~5平 方米即可,高2.5米左右。應(yīng)分別設(shè)置設(shè)1~2個(gè)緩沖、風(fēng)淋間、再進(jìn)入無(wú)菌室,無(wú)菌室和緩沖間都必須密封防止嚙齒動(dòng)物進(jìn)入無(wú)菌室,緩沖間的門(mén)和無(wú)菌室的門(mén)不要朝向同一方向,以免氣流帶進(jìn)雜菌。
安裝兩個(gè)傳遞窗(一個(gè)傳入窗、一個(gè)傳出窗)使傳入傳出物品能夠分開(kāi)傳遞,在靠近進(jìn)風(fēng)位處的傳遞窗作為傳入物品使用,靠近出風(fēng)口的傳遞窗作為傳出物品使用。并在無(wú)菌室的-側(cè)墻面設(shè)置一個(gè)觀察窗, 以便隨時(shí)觀察無(wú)菌室內(nèi)的情況及新人操作學(xué)習(xí)。工作臺(tái)的臺(tái)面應(yīng)該處于水平狀態(tài)。
無(wú)菌室內(nèi)的地面、墻壁必須平整,不易藏污納垢,便于清洗。無(wú)菌室可以用50mm不銹彩鋼夾芯彩板材和玻璃建造,所有交角位為圓弧形密封設(shè)計(jì),地面采用3mm環(huán)氧樹(shù)脂或者PVC膠板,不留地漏。
無(wú)菌室、超凈臺(tái)、傳遞窗、緩沖間和風(fēng)淋間都應(yīng)裝有紫外線燈,無(wú)菌室內(nèi)的紫外燈安裝高度在1.5m~2m之間,安裝的數(shù)量一般為平均1.5W/m3(照射強(qiáng)度≥70MW/cm2),為避免紫外燈對(duì)操作人員造成傷害,紫外燈控制開(kāi)關(guān)應(yīng)當(dāng)設(shè)置在無(wú)菌室外,或者安裝定時(shí)自動(dòng)開(kāi)關(guān)裝置。工作人員進(jìn)入無(wú)菌室應(yīng)在-級(jí)緩沖間穿滅過(guò)菌的服裝,戴帽子,再進(jìn)入風(fēng)淋間使用無(wú)菌風(fēng)進(jìn)一步除掉身.上的塵埃及菌。
二、從操作人員的使用無(wú)菌室的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行規(guī)范化
可將進(jìn)入無(wú)菌室的操作編寫(xiě)成標(biāo)準(zhǔn)操作書(shū),統(tǒng)一檢驗(yàn)人員的操作,以下向大家介紹一下進(jìn)入無(wú)菌室的一般操作步驟。
(1)將無(wú)菌室門(mén)窗密閉,打開(kāi)無(wú)菌室、緩沖間及傳遞箱紫外燈,滅菌至少30min后,關(guān)閉紫外燈。
( 2 )臭氧對(duì)人體有傷害,紫外燈關(guān)閉30min后,操作人員方可進(jìn)入無(wú)菌室及緩沖間。
(3)將需要傳入無(wú)菌室內(nèi)的物品用75%酒精棉充分擦拭或用75%酒精噴霧后放入傳遞箱(傳入窗),關(guān)閉傳遞箱門(mén)。
(4)操作人員進(jìn)入無(wú)菌室,應(yīng)嚴(yán)格遵守進(jìn)入無(wú)菌作業(yè)區(qū)的要求,在緩沖間內(nèi)穿好醫(yī)用手套、用75%酒精噴灑雙手,穿好無(wú)菌服、戴無(wú)菌口罩、無(wú)菌帽子( 將頭發(fā)全部用帽子裹好)、換無(wú)菌室專用鞋。
(5)操作員更衣完畢,進(jìn)入風(fēng)淋間啟動(dòng)風(fēng)淋機(jī)吹無(wú)菌風(fēng)30秒,邊吹邊轉(zhuǎn)動(dòng)身體。
(6)進(jìn)入無(wú)菌室內(nèi),將無(wú)菌室放置樣品的臺(tái)(或者臺(tái)車,如有配備)用75%酒精噴霧,打開(kāi)傳遞箱門(mén)將需要傳入無(wú)菌室內(nèi)的物品從傳遞箱取出并放在臺(tái)上(或臺(tái)車上),備用。
( 7 )操作過(guò)程所有需要傳入的物品用75%酒精棉充分擦拭或用75%酒精噴霧后使用傳入窗傳入,傳出物品使用傳出窗傳出。
注意:在無(wú)菌室中工作時(shí),要求盡量避免走動(dòng)、物品傳遞和少說(shuō)話,盡量減少樣品的暴露時(shí)間。( 如操作人員因故離開(kāi)無(wú)菌室,當(dāng)再次進(jìn)入無(wú)菌室時(shí),必須用75%酒精噴灑雙手,穿好無(wú)菌服、戴無(wú)菌口罩、無(wú)菌帽子(將頭發(fā)全部用帽子裹好)、換無(wú)菌室專用鞋。)檢驗(yàn)過(guò)程有樣品灑落要及時(shí)用酒精棉擦凈。
三、無(wú)菌室維護(hù)保養(yǎng)方面
(1)每天使用無(wú)菌室完畢要進(jìn)行結(jié)束清理,對(duì)無(wú)菌室傳遞箱,超凈臺(tái)及其頂部、四周,無(wú)菌室、緩沖間內(nèi)窗臺(tái)、門(mén)窗、地面,儀器表面及所有無(wú)菌室、緩沖間內(nèi)其它物品用消毒水( 1:50 84消毒液 )或75%酒精進(jìn)行清潔。將無(wú)菌室密閉后,打開(kāi)無(wú)菌室、緩沖間及傳遞箱紫外燈,滅菌至少30min后,關(guān)閉紫外燈。
(2)建立無(wú)菌室空氣微生物檢驗(yàn)計(jì)劃,并按要求定期做無(wú)菌室室內(nèi)空氣以及對(duì)無(wú)菌室地面使用擦拭棒進(jìn)行擦拭實(shí)驗(yàn),檢測(cè)細(xì)菌總數(shù)及真菌( PCA和PDA或孟加拉紅培養(yǎng)基),一般一個(gè)月檢測(cè)一次,出現(xiàn)異常時(shí)增加檢驗(yàn)頻
(3)紫外燈滅菌時(shí)間應(yīng)參考無(wú)菌室室內(nèi)空氣微生物檢測(cè)情況,也可以根據(jù)紫外燈說(shuō)明書(shū)的有效時(shí)間確其的使用時(shí)間。( 紫外線燈管有高硼玻璃和石英玻璃之分,由于高硼玻璃的UV254nm紫外線透過(guò)率只有50%左右,所以其紫外線燈紫外線輻照強(qiáng)度小,壽命短,一般情況標(biāo)準(zhǔn)的紫外燈能放射足夠的紫外線能量1000小時(shí)。石英是紫外線透過(guò)率最高的材料,普通石英可以透過(guò)UV254的80%以上,所以其紫外線強(qiáng)度大,壽命長(zhǎng),殺菌效果好,石英玻璃紫外線燈壽命-般大于6000小時(shí)。) 我們先將所有紫外燈編號(hào)好,然后編制無(wú)菌室紫外燈使用記錄表,采用累加時(shí)間或者累減時(shí)間法以提醒到期更換紫外燈。例如采用遞減法記錄,1號(hào)紫外燈初始時(shí)間是1000h每天操作前后均開(kāi)啟0.5h,即每天使用1h,也就是每天減1h,直至為0,就要更換紫外燈。每天觀察檢查紫外燈使用情況,假如紫外燈還沒(méi)有使用到時(shí)間就燒掉或者發(fā)黑就要提前更換,更換后讀數(shù)重新以1000h開(kāi)始記錄,周而復(fù)始。
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